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第17章 地衣植物标本的采集和制作(3)

附生藻类可制成腊叶标本保存。藻类植物腊叶标本的制作方法与水生种子植物的腊叶标本的制作方法基本相同,但由于藻类标本所含的胶质多,压制时,应在标本上覆盖纱布,以免黏连在吸水纸上。藻类植物腊叶标本的制作方法主要有以下几个步骤:

①漂洗标本。不论是从湖泊或沿海一带采回的各种藻类标本,均须放入盛有淡水的桶(盆)中漂洗,把标本上残存的泥沙和盐分洗净。

②移到纸上。洗净后的藻类标本再次放入清水桶(盆)内。根据标本的大小,取一张较厚的白纸(一般的图画纸或小块台纸)放在托板(薄木板或塑料板)上,左手持板入水,右手从桶(盆)内选取标本,将标本移放在托板的白纸上,用毛笔在临近水面处调理标本姿势,然后斜向将托板轻轻取出。出水过程不可操之过急,既要使白纸不漂离托板,又要使标本不离纸、不移位。出水后的标本,仍需调姿梳理,最好采用小皮头吸管适量地喷冲调姿的办法。

③加压脱水。把托板上的标本连同白纸一起取下,放在标本夹内的吸水纸上。根据标本的大小,取一块棉纱布盖在标本上,主要是防止带有黏胶质的藻类与吸水纸黏连在一起;然后再在标本上盖几张吸水纸,另放其他的藻类标本。全部标本放好后压紧标本夹,放到干燥处脱水。初放进标本夹的藻类标本当天需换纸2次,换纸的同时也要另换干燥的纱布。在比较干燥的室内条件下,一般每天换纸1次,经5~7次后即可压干。

④台纸固定。由于藻体表面有黏胶质,加压后干燥标本已较好地黏在白纸上,无需再加工固定。如需将黏在白纸上的标本移放到植物标本台纸上,可在白纸背面沿边缘适当涂些胶,黏在台纸上就行;有些较长的标本不易黏稳,可用玻璃纸条予以固定。

漂洗标本时可去掉标签;用托板移取标本前要在白纸上用铅笔注明标号(或名称)后再撤掉标签,以免混淆标本的序号或名称。

(3)浸制标本

浮游藻类和附生藻类都可以制作浸制标本。浸制标本所用的固定液种类很多,常用的有以下几种。

①甲醛水溶液。为最常用的固定液,用于固定浮游藻类时,一般可用2%~4%的浓度。其中,固定蓝藻可用2%;固定裸藻和绿藻可用3%;固定鼓藻除用3%浓度外,还要滴加几滴醋酸;对于附生藻类,可用4%~6%的浓度。

②鲁哥氏液。鲁哥氏液最适于固定保存浮游藻类,其优点是能防止鞭毛收缩,并使绿藻的淀粉核变为蓝紫色,便于识别和计算藻体数量。

配方:碘4克、碘化钾6克、蒸馏水100毫升。

配法:先将6克碘化钾溶于20毫升蒸馏水中,搅拌均匀后再加入4克碘,搅拌溶解后,加入80毫升蒸馏水即成。

由于鲁哥氏液中的碘容易挥发,在配成24小时后,须加3%甲醛液,标本才能长期保存。

(4)玻片标本

对微小藻类,制作玻片标本的基本步骤:一是杀生、固定;二是冲洗及脱水;三是染色,四是透明及封藏。以下介绍几种方法:

①甘油封片不染色制作法

a.标本用4%福尔马林固定,时间约12~24小时。

b.载玻片上滴一小滴10%甘油液,吸取沉淀于福尔马林液中标本,滴在甘油液中,用针轻轻搅动,使标本均匀散布。

c.将载玻片放在干燥器或其他容器内,注意防尘,使甘油中水分逐渐蒸发,时间随干燥情况而定。待甘油浓缩至原来1/2时,即可加1滴20%甘油,再静置使水蒸发,然后再加40%甘油。待甘油浓缩至原来容量1/2时,即可加盖玻片,仍使继续蒸发。

d.2~3天后,甘油近于无水状态,此时即可进行密封。

e.密封:需用洪氏两液,其配方为阿拉伯树胶20克、蒸馏水20毫升、水合氯醛17克、甘油3毫升、冰醋酸2毫升。用毛笔沾上此液,涂在盖玻片四周边缘部分(约05~1毫米),过1~2天,用刀轻轻刮去盖玻片四周不平整处,再用瓷漆在四周加固密封。

②甘油封片染色制作法(材料以丝状绿藻为例)。

a.标本用弱铬酸-醋酸液固定24~48小时。

b.将材料倾入广口瓶中,瓶口用纱布包扎,然后在自来水龙头下冲洗(水量可小一些),以除去标本中固定液,时间至少24小时。

c.移入2%铁矾液中2小时。

d.再用自来水冲洗30~60分钟。

e.用05%海氏苏木色素染色3~24小时后,用水冲洗30分钟(苏木色素溶于蒸馏水中需10天,在这段时间中,需经常摇晃玻瓶,以加速溶解。此液配好后,需等2个月,待其自然氧化成氧化苏木色素后才能使用)。

f.用2%铁矾溶液分色,直到满意为止(如染色较浅,4~5分钟已足够)。再在水中冲洗约30~60分钟(冲洗必须彻底,否则封藏后仍继续分色,最后完全失去颜色而失败)。

g.将标本放于2%甘油中,以后根据不染色法使甘油水分蒸发,逐级加浓,加盖玻片,以洪氏两液密封和瓷漆加固。

③甘油明胶法。

把含有藻类的一个水滴放在载玻片上,然后加上一滴3%甘油,用表面皿把标本盖上,再把标本拿到干燥地方放一昼夜,使水分蒸发。结果,藻类就停留在一薄层甘油中,然后把材料放入甘油明胶中。

甘油明胶的制备方法:先把4克明胶放在24毫升蒸馏水中浸2~3小时,然后加入28克甘油和一小块石炭酸晶体。把这些东西倒入烧瓶中,再放在水浴器内煮热,直到明胶完全溶解为止。不要煮得太久,否则就不易凝固。如果甘油明胶在过滤后仍然混浊,那么要在溶解的甘油明胶中加入蛋白,使发生沉淀,再重新过滤。配成的甘油胶在冷却后应为透明的半固体,其黏度可使制成片子侧立在切片盒中时材料不往下沉落。如没有达到这样黏度,可能因为所用明胶质量不好或其他成分不纯。

把材料放入甘油明胶的方法:将经过甘油脱水的材料从甘油中取出,或不需脱水材料(质地较硬,不会发生变形的)从固定剂中取出,在吸水纸上放片刻。然后取适当分量放在洗净载玻片上。材料所占面积的直径不可超过1厘米(用大盖玻片的不在此限),越小越好,立刻加上一块甘油胶,甘油胶多少,因材料大小而不同,通常比火柴头稍大即可。在有深罩的100支光电灯下,用载玻片上的甘油胶熔化,也可用酒精灯代替电灯,但不可使玻片上的温度升得太高。另外也可将整瓶甘油胶在温水中熔化,用玻棒把一小滴甘油明胶加到玻片上,但此法有一个缺点,就是甘油胶一再熔化容易变质。

用镊子去掉已熔化甘油胶表面气泡,静置几分钟待其再度凝固,加上一片洗净盖片。用18或22毫米方盖片,其大小视展开的甘油胶面积而决定。在盖片上轻压,使甘油胶展开成一薄层。在天气寒冷时,将手指在盖片上轻按片刻,使甘油胶能稍熔化而展开,展开后的甘油胶应为圆形,位于玻片中央。盖上盖片,使载片保持水平状态,直到完全凝固为止,过1~2周后,用火漆或指甲漆封住盖片边缘。

甘油明胶装片法是简便的低等植物玻片标本制作法。除简便外,还有另一个优点,就是不需要乙醇和二甲苯。至少有4点好处:一是经济;二是省时间;三是易保存材料原色,尤其是蓝藻和绿藻的颜色;四是材料不会发生明显收缩或变形。其中最后一点最重要,因为这一类材料在乙醇及二甲苯中特别容易变形。但这种方法有一个重要缺点,就是制成片子不能持久。即使在盖片边缘用加拿大胶或漆封得很好,在应用中仍不能像用加拿大胶装作片剂所制片子那样经久耐用。并且在制作时还需十分小心,不能让丝毫甘油胶溢出盖片外,否则封边时就封不密,因为甘油胶不易擦干净。

④甘油胶-加拿大胶改良封片法。

此法是针对上述缺点加以改进。方法是在做好甘油胶装片后,且慢封片,而在盖玻片一边加一滴稀加拿大胶,任其自行渗入盖片下空处而围在甘油胶四周。需要注意加拿大胶只能在一处加入,并注意浓度要适当。如在盖片边缘上两处同时各加一滴胶,盖片下就容易保留空气而形成气泡。

在封得好的片子中,甘油胶与加拿大胶的交界处应该是一条整齐的交界线;封得稍差的交界线内外有油滴或水滴;更差的交界线屈曲如齿状,甚至杂有气泡。这些缺点的原因可能是:载片或盖片未洗净,致使甘油胶在展开时边缘不齐(在制作这一类不染色玻片标本时,未用过的新盖片及载片经肥皂水洗过或煮过,再用清水多次冲洗就可,不必用清洗液洗);或者加入加拿大胶后,盖片下有气泡,用针将气泡压出不尽时,可产生上述缺点。

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